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色譜柱的物理性質、化學性質介紹

點擊次數:2942 發布時間:2022-05-17
  色譜柱的物理性質、化學性質介紹
  色譜柱的選擇直接影響了液相色譜分析中分離效果的好壞,選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發所需的時間,并且使方法更具穩定性。
  根據色譜柱的參數可以給我們提供一個初步的選擇,但由于各個儀器廠商的填料技術和鍵合技術都有差異。即使都是C18柱,不同品牌、同一品牌不同系列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐溫的、有適合堿性樣品的等等。
  一、物理性質:
  1、柱長,內徑,如250*4.6mm。一般柱長在2—250mm,柱越長,分離度越,但柱壓更,分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比,所以一昧增加柱長并不是*的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
  2、粒徑,影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越,但柱壓力越,柱容易被污染,導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,復雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,更大內徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。
  3、孔徑,60A,100A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率,比表面積大,載碳量;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配,分子自由進出填料孔并與孔內表面的鍵合相進行分離分配,通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上,一般小分子使用80—120A,大分子使用300A。
  4、顆粒形狀,一般有球形和不規則形,當使用黏度較大的流動相時,球形顆粒可以降低柱壓,延長色譜柱壽命。
  二、化學性質:
  1、硅膠基質:通用的基質,度大,化學修飾容易,但使用的pH值范圍有限(一般為2—8,修飾的可以達到1—12)。
  2、聚合物基質:多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩定,應用pH范圍寬,具有更的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重復性較差,商品化色譜柱不多,一般價格較貴。
  3、載碳量:基質表面鍵合相的比例,載碳量,則保留增加,適合分析非性化合物。

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